ⅠNácido ucleicoiintrodução
O ácido nucleico é dividido em ácido desoxirribonucleico (DNA) e ácido ribonucleico (RNA), entre os quais o RNA é dividido em RNA ribossômico (rRNA), RNA mensageiro (mRNA) e RNA de transferência (tRNA) de acordo com suas diferentes funções.O DNA está concentrado principalmente no núcleo, mitocôndrias e clorofórmio, enquanto o RNA está distribuído principalmente no citoplasma.Como base material da expressão genética, a extração de ácidos nucleicos desempenha um papel extremamente importante na pesquisa de biologia molecular e no diagnóstico molecular clínico.A concentração e pureza da extração de ácidos nucleicos afetarão diretamente a PCR subsequente, sequenciamento, construção de vetores, digestão enzimática e outros experimentos.
Ⅱ Método de extração e purificação de ácido nucleico
① Método de extração de fenol/clorofórmio
A extração de fenol/clorofórmio é um método clássico de extração de DNA, que utiliza principalmente dois solventes orgânicos diferentes para tratar as amostras, dissolvendo ácido nucleico à base de DNA na fase aquosa, lipídios na fase orgânica e proteínas entre as duas fases.Este método tem as vantagens de baixo custo, alta pureza e bom efeito.As desvantagens são operação complicada e muito tempo.
② Método Trizol
O método Trizol é um método clássico para extração de RNA.O método Trizol é dividido em fase aquosa e fase orgânica após centrifugação com clorofórmio, em que o RNA é dissolvido na fase aquosa, a fase aquosa é transferida para um novo tubo EP, a precipitação é obtida após adição de isopropanol e, em seguida, purificação do etanol.Este método é adequado para extração de RNA de tecidos animais, células e bactérias.
③ Método de purificação de coluna centrífuga
O método de purificação de coluna centrífuga pode adsorver DNA especificamente por meio de materiais especiais de adsorção de matriz de silício, enquanto o RNA e a proteína podem passar suavemente e, em seguida, usar alto teor de sal e baixo PH para combinar ácido nucleico, eluição com baixo teor de sal e alto valor de PH para separar e purificar o ácido nucleico.As vantagens são alta concentração de purificação, alta estabilidade, sem necessidade de solvente orgânico e baixo custo.A desvantagem é que precisa ser centrifugado passo a passo, mais etapas de operação.
④ Método de contas magnéticas
O método das esferas magnéticas consiste em dividir a amostra de tecido celular através do lisado, liberar o ácido nucleico na amostra e, em seguida, as moléculas de ácido nucleico são especificamente adsorvidas na superfície da esfera magnética, enquanto impurezas como proteínas e açúcares são deixadas em o liquido.Através das etapas de divisão do tecido celular, ligação do cordão magnético com ácido nucleico, lavagem de ácido nucleico, eluição de ácido nucleico, etc., o ácido nucleico puro é finalmente obtido.As vantagens são operação simples e uso em curto espaço de tempo, sem a necessidade de centrifugação escalonada.Possui baixos requisitos técnicos e pode realizar operação automática e em massa.A combinação específica de esfera magnética e ácido nucleico torna o ácido nucleico extraído com alta concentração e pureza.A desvantagem é que o preço de mercado atual é relativamente caro.
⑤ Outros métodos
Além dos quatro métodos acima, existem o craqueamento por ebulição, o método do sal concentrado, o método do detergente aniônico, o método ultrassônico e o método enzimático, etc.
Ⅲ Tipo de extração de ácido nucleico
A Foregene possui a plataforma de PCR direta líder mundial, plataforma de isolamento de RNA de coluna dupla (somente DNA + somente RNA).Os principais produtos incluem kits de isolamento de DNA/RNA, séries de reagentes de laboratório molecular de reagentes PCR e PCR direto.
① Extração total de RNA
Amostras de extração de RNA total incluem sangue, células, tecidos animais, plantas, vírus, etc. Alta pureza e alta concentração de RNA total podem ser obtidas através da extração de RNA total, que pode ser usada em RT-PCR, análise de chip, tradução in vitro, clonagem molecular, Dot Blot e outros experimentos.
Relacionado ao ForegeneKits de isolamento de RNA
Kit de isolamento de RNA total animal--Extraia de forma rápida e eficiente RNA total de alta pureza e qualidade de vários tecidos animais.
Kit de isolamento de RNA total celular--RNA total altamente purificado e de alta qualidade pode ser obtido de várias células cultivadas em 11 minutos.
Kit de isolamento de RNA total de planta--Extraia rapidamente RNA total de alta qualidade de amostras de plantas com baixo teor de polissacarídeos e polifenóis.
Kit de isolamento de RNA viral--Isole e purifique rapidamente o RNA viral de amostras como plasma, soro, fluidos corporais livres de células e sobrenadantes de cultura celular.
② Extração de DNA genômico
Amostras de extração de DNA genômico incluem solo, fezes, sangue, células, tecidos animais, plantas, vírus, etc. A extração de DNA genômico pode ser usada na digestão enzimática, construção de biblioteca de DNA, PCR, preparação de anticorpos, análise de hibridização Western blot, chip genético, alta -sequenciamento de rendimento e outros experimentos.
Relacionado ao ForegeneKits de isolamento de DNA
Kit de isolamento de DNA de tecido animal--Rápida extração e purificação de DNA genômico de múltiplas fontes, como tecidos animais, células, etc.
Kit Midi DNA Sanguíneo (1-5ml)--Purifique rapidamente o DNA genômico de alta qualidade do sangue anticoagulado (1-5ml).
Kit de isolamento de DNA para esfregaço bucal/cartão FTA--Purifique rapidamente o DNA genômico de alta qualidade a partir de amostras de esfregaço bucal/cartão FTA.
Kit de isolamento de DNA vegetal--Purifique e obtenha rapidamente DNA genômico de alta qualidade de amostras de plantas (incluindo polissacarídeos e amostras de plantas de polifenol)
③ Extração de plasmídeo
O plasmídeo é um tipo de pequena molécula circular de DNA nas células, que é um transportador comum para a recombinação do DNA.O método de extração de plasmídeo consiste em remover o RNA, separar o plasmídeo do DNA genômico bacteriano e remover proteínas e outras impurezas para obter um plasmídeo relativamente puro.
Mini Kit de Plasmídeo Geral--Purifique rapidamente o DNA plasmídico de alta qualidade de bactérias transformadas para experimentos de biologia molecular de rotina, como transformação e digestão enzimática
④ Outros tipos de extração, extração de miRNA, etc.
Kit de isolamento de miRNA animal--Extrair de forma rápida e eficiente pequenos fragmentos de RNA de 20-200nt miRNA, siRNA, snRNA de vários tecidos e células animais
Ⅳ Requisitos para extração de ácido nucleico e resultado de purificaçãos
① Para garantir a integridade da estrutura primária do ácido nucleico.
② Reduza a interferência de proteínas, açúcares, lipídios e outras macromoléculas
③ Não deve haver solvente orgânico ou alta concentração de íons metálicos que possam inibir a enzima em amostras de ácido nucleico.
④ A contaminação por RNA e outros ácidos nucleicos deve ser eliminada durante a extração de DNA e vice-versa.
Horário da postagem: 24 de novembro de 2022